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柱色譜法詳解：吸附柱色譜與分配柱色譜的完整操作指南！

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一、吸附柱色譜

色譜柱為內(nèi)徑均勻、下端（帶或不帶活塞）縮口的硬質(zhì)玻璃管，端口或活塞上部鋪墊適量棉花或玻璃纖維，管內(nèi)裝入吸附劑。吸附劑的顆粒應(yīng)盡可能大小均勻，以保證良好的分離效果．除另有規(guī)定外，通常采用直徑為0.07～0.15mm的顆粒。色譜柱的大小，吸附劑的品種和用量，以及洗脫時(shí)的流速，均按各品種項(xiàng)下的規(guī)定。

1．吸附劑的填裝

（1）干法：將吸附劑一次加入色譜柱，振動(dòng)管壁使其均勻下沉，然后沿管壁緩緩加入洗脫劑；若色譜柱本身不帶活塞，可在色譜柱下端出口處連接活塞，加入適量的洗脫劑，旋開活塞使洗脫劑緩緩滴出，然后自管頂緩緩加入吸附劑，使其均勻地潤濕下沉，在管內(nèi)形成松緊適度的吸附層。操作過程中應(yīng)保持有充分的洗脫劑留在吸附層的上面。

（2）濕法：將吸附劑與洗脫劑混合，攪拌除去空氣泡，徐徐傾入色譜柱中，然后加入洗脫劑將附著在管壁的吸附劑洗下，使色譜柱面平整。

等填裝吸附劑所用洗脫劑從色譜柱自然流下，至液面和柱表面相平時(shí)，即加供試品溶液。

2．供試品的加入除另有規(guī)定外，將供試品溶于開始洗脫時(shí)使用的洗脫劑中，再沿管壁緩緩加入，注意勿使吸附劑翻起?；?qū)⒐┰嚻啡苡谶m當(dāng)?shù)娜軇┲?，與少量吸附劑混勻，再使溶劑揮發(fā)去盡使呈松散狀，加在已制備好的色譜柱上面。如供試品在常用溶劑中不溶，可將供試品與適量的吸附劑在乳缽中研磨混勻后加入。

3．洗脫除另有規(guī)定外，通常按洗脫劑洗脫能力大小遞增變換洗脫劑的品種和比例，分部收集流出液，至流出液中所含成分顯著減少或不再含有時(shí)，再改變洗脫劑的品種和比例。操作過程中應(yīng)保持有充分的洗脫劑留在吸附層的上面。

二、分配柱色譜

方法和吸附柱色譜基本一致。裝柱前，先將固定液溶于適當(dāng)溶劑中，加入適宜載體，混合均勻，待溶劑完全揮干后分次移入色譜柱中并用帶有平面的玻棒壓緊；供試品可溶于固定液，混以少量載體，加在預(yù)制好的色譜柱上端。洗脫劑需先加固定液混合使之飽和，以避免洗脫過程中固定液的流失。