?????? 經(jīng)常做蛋白質(zhì)純化分離實驗的色譜工作者，對于疏水色譜（Hydrophobic interaction chromatography，簡寫HIC）肯定不陌生，血清蛋白、膜結(jié)合蛋白、核蛋白、受體、重組蛋白等化合物純化都需要用HIC色譜法。HIC在是利用樣品分子與固定相的疏水力作用的不同，用流動相洗脫時，各組分遷移速度不同而達(dá)到分離的目的。疏水相互作用色譜法具有對蛋白質(zhì)的回收率高，蛋白質(zhì)不失活，蛋白質(zhì)變性可能性小等優(yōu)點。
?????? 疏水作用色譜固定相的非極性比較弱，流動相多采用高濃度鹽緩沖液進(jìn)行梯度洗脫。溫和的分離條件，可以避免反相色譜中由于固定相較強的疏水性和有機流動相引起蛋白質(zhì)的不可逆吸附和變性，因此特別適用于活性物質(zhì)的分離與純化。
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??????? 在進(jìn)行分析時，需要注意幾點：溶液的pH值，pH值的不同對蛋白質(zhì)純化的效果也會不同。如果你想要蛋白質(zhì)洗脫順利，pH值可以遠(yuǎn)離其等電點，疏水性減少，蛋白質(zhì)與固定相配基結(jié)合不易，有利于蛋白質(zhì)洗脫。想要提高層析柱的分離度，可以從提高柱溫入手。柱溫升高可以使疏水作用增加，吸附能力增加，從而提高分離度。
??????? 層析柱分離效果好不好，不僅是這些因素影響，平常的保養(yǎng)以及使用方法也需要注意。使用一段時間后，可以將柱子沖洗一下，將雜質(zhì)洗掉，避免雜質(zhì)影響分析結(jié)果，比如雜峰的出現(xiàn)。可以在柱前添加一個色譜保護(hù)柱，它可以截留樣品中一些強殘留、強酸性和強堿性物質(zhì)，防止它們污染和破壞色譜柱中的填料。恒譜生多款色譜保護(hù)柱及柱芯適用于不同的色譜柱，匹配到您的各種需求。恒譜生自主研發(fā)的2.1超高壓分析保護(hù)柱，特別適合用于超高效液相色譜，死體積少，無背壓，精心設(shè)計，省去中間鏈接的管路和螺絲接頭，更利于操作。
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??????? 疏水相互作用色譜有很多優(yōu)點，當(dāng)然也有缺點，比如有的蛋白質(zhì)在高鹽中溶解度降低，所以它的應(yīng)用能力范圍會受到一定限制，比較適合疏水性蛋白質(zhì)純化分離。想了解更多色譜資訊，可關(guān)注恒譜生！每周定期分享，共同進(jìn)步！
發(fā)布于: 2021-08-20